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提示：

荧光抗体染色直接法、间接法、补体结合荧光免疫法各有何优缺点?

(1)直接法：①优点：操作简便、特异性强、非特异性荧光干扰因素少；②缺点：敏感性偏低，每检查一种抗原需制备相应的特异荧光抗体。(2)间接法：①优点：敏感性高于直接法，制备一种荧光抗体可用于检测多种抗原或抗体；②缺点：参与的因素多，易出现非特异性荧光，操作时间较长。(3)补体结合法：①优点：敏感性高，制备一种荧光抗体可检测多种抗原或抗体，适用任何动物的抗原抗体系统；②缺点：易出现非特异性荧光染色，每次试验都需要新鲜补体，操作复杂。

直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同

提示：

直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的异同

1、接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的不同： 直接免疫荧光的实验方案通常较短，因为它只需要一个标记步骤。间接免疫荧光使用偶联二抗检测一抗会增加额外的操作步骤。 直接免疫荧光方法的实验方案步骤较少，更简单。间接免疫荧光方法中必须选择适当的二抗，增加了复杂度。这种情况在需要使用多个二抗的多色实验中尤为突出，每个二抗需要靶向不同的物种并偶联至不同染料。 直接免疫荧光方法中获得的信号与间接方法相比可能较弱，因为直接方法中没有使用二抗进行信号放大。免疫荧光多个二抗结合一抗可使信号放大。 2、直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的相同之处： 免疫荧光 (IF) 或细胞成像技术使用抗体将荧光染料（也称为荧光素或荧光物）标记到特异性目标抗原上，所用荧光染料有诸如异硫氰酸荧光素 (FITC) 等。而通过化学方法偶联荧光素的抗体被广泛使用于IF实验中。 根据荧光素与一抗还是二抗偶联，我们将 IF 方法分为两类：直接 IF-使用单个抗体，该抗体直接指向目的靶标，一抗与荧光素直接偶联；间接 IF-使用两个抗体，一抗未偶联，荧光素偶联的二抗指向一抗，并用于检测。 间接法测抗体基本原理： 染色程序分为两步，第一步，用未知未标记的抗体（待检标本）加到已知抗原标本上，在湿盒中37℃保温30min，使抗原抗体充分结合，然后洗涤，除去未结合的抗体。 第二步，加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应，标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合，从而可鉴定未知抗体。 参考资料来源：百度百科——免疫荧光间接染色原理